DNA測(cè)序是確定核苷酸堿基序列的重要分子生物學(xué)技術(shù)，目前市場(chǎng)上主流的是第二代高通量測(cè)序，其基于大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)，能同時(shí)完成測(cè)序模板互補(bǔ)鏈的合成和序列數(shù)據(jù)的獲取。IVD是指體外診斷，包括生化診斷，免疫診斷，血球檢測(cè)，分子診斷，以及POCT。在IVD市場(chǎng)中，測(cè)序是分子診斷中一項(xiàng)不可或缺的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。隨著以上兩種生物技術(shù)的發(fā)展，測(cè)序建庫(kù)顯得尤為重要。建庫(kù)是指將DNA處理成固定的模式，建庫(kù)第一步，就是DNA片段化，這對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)來說更為關(guān)鍵。

　　實(shí)驗(yàn)樣品：人全血DNA

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>生物DNA樣本需要打斷到150-300bp進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序建庫(kù)實(shí)驗(yàn)，為得到這一片段長(zhǎng)度下的樣本，需進(jìn)行梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)。

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)備：

　　高通量聲波基因組剪切儀 JXDNA-500PICO

　　實(shí)驗(yàn)過程：

　　1.將適配器放入水槽，打開冷水機(jī)預(yù)冷至4度

　　2.將稀釋好的同一濃度DNA樣本按體積梯度投入0.2mL的離心管，標(biāo)好編號(hào)，震蕩離心

　　3.將離心管放入適配器（注意水平配平，盡量將樣品放置在適配器外圈）

　　4.設(shè)置好能量，工作時(shí)間，間隙時(shí)間，循環(huán)工作，總時(shí)長(zhǎng)梯度為17min，20min，25min

　　5.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出樣本，進(jìn)行電泳檢測(cè)

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

　　綜上結(jié)果可見，樣品投入量能影響檢測(cè)熒光強(qiáng)度，超聲打斷時(shí)間能影響片段長(zhǎng)度。綜合下機(jī)樣品的片段長(zhǎng)度和熒光強(qiáng)度，以及片段集中性，選擇20μL打斷25min作為實(shí)驗(yàn)條件。

　　注意事項(xiàng)：

　?。?）同等條件下人體DNA打斷難度大于小鼠大于植物，不同的實(shí)驗(yàn)樣品需單獨(dú)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，不可混用實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　?。?）注意離心管內(nèi)樣本體積，確保儀器內(nèi)水位能完全沒過樣品。

　　（3）離心管需要配平，適配器壓蓋禁止傾斜，避免樣本開蓋污染。

　　（4）冷水機(jī)需要提前打開預(yù)冷，水流循環(huán)要調(diào)整穩(wěn)定不能過于激烈

　　在高通量測(cè)序樣本制備過程中，DNA片段化處理是一個(gè)核心步驟。因此隨機(jī)、準(zhǔn)確、集中無偏差的DNA片段化是保證DNA文庫(kù)質(zhì)量和均一性的關(guān)鍵一步。本設(shè)備為DNA片段化又提供了新的研究手段，進(jìn)一步推動(dòng)了分子生物學(xué)的研究發(fā)展。

　　參考文獻(xiàn)：

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　　[2]馬強(qiáng),鄒東梅,郭軼先,等.高通量測(cè)序分析B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤IGH基因克隆性重排特點(diǎn)及臨床應(yīng)用價(jià)值[J].腫瘤防治研究,2024,51(05):368-372.

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