胰蛋白酶由于其能夠特異性酶解精氨酸和賴氨酸羧基端，是基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛的蛋白酶。胰蛋白酶切割胰島素原生成胰島素，在胰島素的生產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用，以豬源胰蛋白酶基因?yàn)槟０澹寺U(kuò)增胰蛋白酶原(TgM)基因，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌，構(gòu)建含TgM基因的工程菌株并誘導(dǎo)表達(dá)，菌液經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)破碎，收集破碎后菌液，經(jīng)提純后得到胰蛋白酶原液，用于后續(xù)酶活測(cè)定等試驗(yàn)。本研究中，菌體破碎使用的是高壓均質(zhì)機(jī)，可將工程菌株破碎率提升，最后得到較高濃度的蛋白溶液。

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)備

高壓均質(zhì)機(jī) GSL-5

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.準(zhǔn)備高壓均質(zhì)機(jī)GSL-5（定制17ml處理量帶在線排氣）1臺(tái)、標(biāo)配款冷水機(jī)1臺(tái)。

　　2.收集大腸桿菌樣品進(jìn)行儀器上機(jī)前處理。

　　3.清洗儀器，倒入處理后的大腸桿菌樣品；壓力調(diào)大800-1000bar處理3-4遍。

　　4.壓力歸零，收集均質(zhì)后的樣品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　均質(zhì)前均質(zhì)后用紫外分光光度法檢測(cè)酶活力，并將最終純化獲得的突變胰蛋白酶用于后續(xù)與胰島素原相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

　　實(shí)驗(yàn)效果：

　　注意事項(xiàng)：

　　1、注意GSL-5帶在線排氣最小處理量，控制好樣本進(jìn)樣量。

　　2、大腸桿菌在均質(zhì)時(shí)排空會(huì)有較多氣泡屬于正常情況。

　　高壓均質(zhì)機(jī)是一款利用高壓泵將物料加壓至一定壓力后，通過均質(zhì)閥的狹窄縫隙，使物料在高壓下受到剪切、沖擊和空穴效應(yīng)等作用，從而達(dá)到均質(zhì)、乳化和破碎等目的的設(shè)備，具有壓力高、體積小、操作便捷、處理效率高等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于制藥、生物工程、食品、精細(xì)化工等領(lǐng)域。

　　參考文獻(xiàn)：

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