實(shí)驗(yàn)背景
酵母菌有多種類型,被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)研究。酵母菌具有發(fā)酵生產(chǎn)成本低、生物合成能力高、安全無毒、繁殖能力強(qiáng)且易于培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn),使其成為重要的模式生物。在對酵母菌進(jìn)行各種研究的同時,其細(xì)胞的破碎率、破碎后蛋白質(zhì)和核酸的得率對后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究起到了十分重要的作用。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簽橥瓿蓪湍妇鷺悠返木|(zhì)破碎,提取核酸,查看轉(zhuǎn)錄的目的基因,檢驗(yàn)轉(zhuǎn)錄是否成功。
實(shí)驗(yàn)材料:酵母菌細(xì)胞懸液
實(shí)驗(yàn)儀器:
高壓均質(zhì)機(jī)JXNANO-15
實(shí)驗(yàn)操作:
1、使用2根膠管將冷水機(jī)的進(jìn)出水口和主機(jī)出料冷卻器連接。
2、冷水機(jī)加水,打開冷水機(jī)進(jìn)行預(yù)冷。
3、冷水機(jī)達(dá)到預(yù)設(shè)溫度后,確保壓力閥門處于松弛的狀態(tài)下,打開電源開關(guān)。
4、進(jìn)料口處(料斗)先加入適量的水,排除管道內(nèi)的空氣。
5、等待進(jìn)料杯水快完全進(jìn)入進(jìn)料口時,加入100ml的酵母菌,調(diào)節(jié)壓力1200bar~1600bar(120mpa~160mpa),進(jìn)行均質(zhì),重復(fù)三遍,得到均質(zhì)樣品。
6、均質(zhì)后將樣品接入干凈的容器中。
7、處理完樣品后,先卸壓,將泵體內(nèi)殘留液排盡。
8、再加入清水,進(jìn)行清洗。
實(shí)驗(yàn)效果:
樣品均質(zhì)前后效果對比圖
高壓均質(zhì)機(jī)對酵母菌樣品的破壁實(shí)驗(yàn)時間短、細(xì)胞破碎率高、核酸提取度高,對后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究很有幫助。高壓均質(zhì)機(jī)不僅對細(xì)胞破碎有良好的效果,對懸浮液(或乳化液)的均質(zhì)效果也非常理想;它可降低分散物尺度,使分散物分布更均勻,在生物技術(shù)和制藥領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。